Rendimiento y datos de RNAdvance Blood

Extracción de ARN de tubos de recogida de sangre estabilizadores de ARN

El kit RNAdvance Blood es un kit de reactivos de aislamiento de ácido ribonucleico (ARN) construido con tecnología basada en esferas paramagnéticas de SPRI. Permite la purificación del ARN de alta calidad de sangre recogida con tubos PAXgene. La extracción se puede ejecutar manualmente en formato de tubo de 2 ml o en formato de 96 pocillos, o automatizarse en formato de 96 pocillos en diversas estaciones de trabajo de manipulación de líquidos Biomek de Beckman Coulter. El ARN total extraído de la sangre conservada en PAXgene utilizando el kit RNAdvance Blood no contiene ADNg detectable ni otros inhibidores de la PCR.

  • Compatible con ensayos basados en PCR posteriores
  • Produce ARN de alta calidad
  • Eliminación eficiente de ADN genómico y otros contaminantes

 

Integridad del ARN coherente entre muestras

Se tomaron muestras de tres tubos diferentes extraídas del mismo donante en el mismo día. Todas las muestras se prepararon en menos de 6 horas desde la extracción de la sangre, y esta se mantuvo en hielo o a 4 °C antes de extraer el ARN. Las puntuaciones RIN promediaron 9,4 con una desviación estándar de 0,4 para las 9 muestras preparadas. Las puntuaciones RIN se evaluaron utilizando un ensayo del bioanalizador RNA 6000 Nano (Agilent).

Genómica RNAdvance Blood Datos de eucariota

 

RNAdvance Blood aísla ARN con un rendimiento superior en comparación con otros proveedores

En la Figura 3 (abajo), las muestras se cuantificaron utilizando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). El kit RNAdvance Blood aisló dos veces más ARN que los kits de los proveedores B y C. En la Figura 4 (abajo), se evaluó la pureza de las muestras utilizando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). Las barras de error representan la desviación estándar de tres réplicas técnicas. El ARN aislado con RNAdvance Blood es apto para su uso en aplicaciones posteriores.

Genómica RNAdvance Blood Rendimiento y pureza

 

RNAdvance proporciona un rendimiento consistente

En la Figura 5 (abajo), se extrajo el ARN de 6 donantes de 2 usuarios diferentes en menos de 24 horas. Las muestras se cuantificaron utilizando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). Ambos usuarios extrajeron cantidades totales de ARN similares. Las barras de error representan la desviación estándar de tres réplicas técnicas.

Genómica RNAdvance Blood Rendimiento de los donantes

 

RNAdvance elimina los inhibidores de ADN y PCR para su uso en aplicaciones posteriores

La capacidad de la PCR se evaluó mediante qRT-PCR utilizando un conjunto de cebadores (cebador de avance 5'-ggacttcgagcaagagatgg-3' y cebador inverso 5'-agcactgtgttggcgtacag-3') diseñado para abarcar los exones 4 y 5 del gen beta (β) actina (ActB) para producir 327 amplicones de pares de bases. En la Figura 6 (abajo), el control no RT también demuestra la eliminación de ADN que puede interferir con las aplicaciones de ARN posteriores. En la Figura 7 (abajo), el ARN aislado utilizando el kit RNAdvance Blood era amplificable, indicando que el kit eliminó los inhibidores de la PCR.

Genómica RNAdvance Blood Gráfico de amplificación 

 

RNAdvance aísla grandes cantidades de ARN de alta calidad de sangre recogida en tubos PAXgene de hasta 4 días

El ARN se extrajo de 6 donantes 4 días después de la donación. La sangre se recogió en tubos de ARN PaxGene y se almacenó a 4 °C. En la Figura 8 (abajo), los rendimientos de ARN fueron consistentemente de 1 μg de ARN a partir de 400 μl de sangre. Hubo más varianza del donante en la extracción del día 2 al 4 que en el día 1. En la Figura 9 (abajo), la pureza no cambió de forma significativa durante los 4 días y fue aceptable para aplicaciones posteriores. Las barras de error representan la desviación estándar de tres réplicas técnicas.

Genómica RNAdvance Blood Tubos Paxgene durante 4 días

 

Flujo de trabajo visual

Genómica RNAdvance Blood Flujo de trabajo 
  1. Lisar la sangre recogida en los tubos PAXgene en tampón de lisis y proteinasa K
  2. Unir el ARN a las esferas magnéticas
  3. Separar las esferas magnéticas de los contaminantes
  4. Lavar las esferas magnéticas con tampón de lavado y etanol al 70 % para eliminar los contaminantes
  5. Tratar las muestras con DNasa I
  6. Reunir el ARN a las esferas magnéticas con tampón de unión 2
  7. Lavar las esferas magnéticas con etanol al 70 % para eliminar los contaminantes
  8. Eluir el ARN de las esferas magnéticas
  9. Transferir a una nueva placa

 

Extracción de ARN de las muestras en menos tiempo y con menos acciones de pipeteo en comparación con los usuarios de kits basados en columnas

Genómica RNAdvance Blood Tiempo total y acciones de pipeteo

La Figura 10 (arriba) representa el tiempo total para extraer ARN de 1 a 96 muestras utilizando RNAdvance Blood o un proveedor basado en columnas. Incluso a 15 muestras, el tiempo total para extraer ARN de sangre es más rápido utilizando RNAdvance Blood. En la Figura 11 (arriba) se destaca el número total de acciones de pipeteo, incluyendo dispensación en una muestra, mezcla de una muestra y eliminación de las puntas, requerido para 1, 8, 24, 48 y 96 muestras. Con la capacidad de utilizar una pipeta multicanal, hay significativamente menos acciones de pipeteo que deban tener lugar que con los proveedores basados en columnas.

 

Para uso en métodos manuales o automatizados basados en el tamaño del lote o el rendimiento general

Tiempo de trabajo y tiempo total estimados en horas necesarios para realizar 8, 24, 48 y 96 extracciones de ARN con RNAdvance Blood. Los métodos se pueden ejecutar de forma manual o automatizada en una estación de trabajo de manipulación de líquidos. Los datos representados en esta tabla se basan en una estación de trabajo genómica Biomek i7 Hybrid. Se indica la diferencia de tiempo entre los modos manual y automatizado (NR = no recomendado).

 

RNAdvance Blood Manual Automatizado
Tamaño del lote 8 Tiempo de trabajo 1,00 0,25
Tiempo total 1,50 2,50
24 Tiempo de trabajo 1,50 0,25
Tiempo total 2,00 2,50
48 Tiempo de trabajo NR 0,25
Tiempo total NR 2,50
96 Tiempo de trabajo NR 0,25
Tiempo total NR 3,00

 

Productos RNAdvance Blood para aislamiento de ARN de sangre

RNAdvance Blood está disponible en tres tamaños de kit según sus necesidades de procesamiento. Haga clic en el número de pieza específico que aparece a continuación para comprar o solicitar un presupuesto. Para obtener más información, consulte nuestra página de aislamiento de ARN de sangre con RNAdvance.

N.º DE PIEZA NOMBRE PREPARACIONES
A35603 Kit RNAdvance Blood  50
A35605 Kit RNAdvance Blood  96
A35604 Kit RNAdvance Blood  384

 

 

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