Rendimiento y datos de CosMCPrep

Purificación de plásmidos de copia alta y baja

CosMCPrep es un procedimiento versátil de purificación de plásmidos basado en la tecnología de esferas paramagnéticas de inmovilización reversible de fase sólida (SPRI). CosMCPrep utiliza un único protocolo para purificar una variedad de plantillas de número de alto y bajo número de copias, manteniendo al mismo tiempo la flexibilidad para apoyar el procesamiento tanto manual como automatizado.

  • Aislamiento de plásmidos de alta calidad
  • Protocolo único para la purificación de todos los tipos de plantilla
  • Los procedimientos de automatización producen una variabilidad mínima en el rendimiento y la calidad de los plásmidos 

 

Alta recuperación de ADN plasmídico pequeño de alta calidad y ADN plasmídico grande de E. coli y pseudomonas aeruginosa

Tipo de plásmido Concentración (ng/μl)  Rendimiento (µg) 
Número de copia alta de plásmido pequeño (<> 359,2 14,4
Número de copia alta de plásmido pequeño (<10 kb) aislado="" de=""> 120,0 4,8
Plásmido grande (>100 kb) de ocurrencia natural 90,3 3,6

Genómica CosMCPrep Rendimiento Pureza del plásmido

Figure 1

El ADN plasmídico se aisló de dos cepas de E. coli utilizando el kit CosMCPrep; una de las cepas transportó un plásmido pequeño (<10 kb) y="" la="" otra="" un="" plásmido="" grande="" (="">100 kb) de ocurrencia natural y de P. aeruginosa que llevaba un plásmido pequeño de copia alta. La concentración y el rendimiento del ADN plasmídico se cuantificaron utilizando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). El rendimiento y la pureza del plásmido se evaluó utilizando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific).

En la Figura 1 (derecha), las proporciones A260/280 y A260/230 de todos los plásmidos están dentro de las proporciones satisfactorias para aplicaciones posteriores. *Las proporciones aceptables son de 1,8 a 2,0 para A260/280 y de 2,0 a 2,2 para A260/230, pero debido a las variaciones de las proporciones de nucleótidos y de las concentraciones de ADN, las proporciones pueden ser superiores (Thermo Scientific, Boletín técnico T042).

 

Preparaciones mini, midi o maxi, todas utilizando el mismo kit

Volumen nocturno (ml)  Concentración promedio (ng/μl)  Rendimiento promedio (µg)  Promedio de A260/A280  Promedio de A260/A230 
0,8 258 10,3 2,1 2,0
2 1893 74,0 2,2 2,8
5,5 2978 298,0 1,9 2,4

Genómica CosMCPrep Rendimiento Volumen nocturno

Figure 2

El plásmido pequeño (<10 kb) de="" número="" de="" copia="" alto="" se="" aisló="" de="" e.="" coli.="" se="" lisaron="" tres="" volúmenes="" del="" mismo="" crecimiento="" nocturno="" y="" se="" aisló="" el="" plásmido="" utilizando="" el="" kit="" cosmcprep.="" la="" entrada="" más="" grande="" produjo="" un="" aumento="" lineal="" de="" la="" concentración="" de="" plásmido.="">

Tipos de plásmidos compatibles:

  • Plásmidos de número de copia alto
  • Plásmidos de número de copia bajo
  • BAC
  • Cósmidos
  • Fósmidos
  • Plásmidos grandes de ocurrencia natural

 

CosMCPrep requiere menos tiempo de trabajo

La extracción de ADN plasmídico utilizando CosMCPrep requiere menos tiempo de trabajo y menos pasos de pipeteo en comparación con la extracción con kits basados en columnas. La Figura 3 representa el tiempo total de preparación de los plásmidos de una muestra para 1 a 96 muestras utilizando CosMCPrep o un kit basado en columnas. A 10 muestras, el tiempo de trabajo para preparar los plásmidos es mejor utilizando CosMCPrep. Número total de acciones de pipeteo (Figura 4), incluyendo dispensación en una muestra, mezcla de una muestra y eliminación de las puntas, requerido para 1, 8, 24, 48 y 96 muestras. Con la capacidad de utilizar una pipeta multicanal, hay significativamente menos acciones de pipeteo que deban tener lugar que con los kits basados en columnas.

Genómica Genfind v2 Rendimiento del ADN

Figure 3

Genómica Genfind v2 Pureza del ADN

Figure 4

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Flujo de trabajo visual

 Genómica CosMCPrep Purificación de plásmido de ADN 
  1. Sedimentar las células
  2. Resuspender las células en RE1
  3. Lisar las células en solución L2
  4. Añadir solución N3 para neutralizar la lisis
  5. Lisar el sedimento y transferir el sobrenadante
  6. Unir el ADN plasmídico a las esferas magnéticas
  7. Separar las esferas magnéticas de los contaminantes
  8. Lavar las esferas magnéticas con etanol al 70 % para eliminar los contaminantes
  9. Repetir el lavado 3 veces
  10. Eluir el plásmido de las esferas magnéticas
  11. Transferir a una nueva placa

 

Productos CosMCPrep para purificación de plásmidos

CosMCPrep está disponible en dos tamaños de kit según sus necesidades de procesamiento. Haga clic en el número de pieza específico que aparece a continuación para comprar o solicitar un presupuesto. Para obtener más información, consulte nuestra página de purificación de plásmidos de ADN con CosMCPrep.

N.º DE PIEZA NOMBRE PREPARACIONES
A37064 CosMCPrep  384
A29174 CosMCPrep  4000

 

 

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