Agencourt FormaPure

El sistema Agencourt FormaPure proporciona un proceso simple y de fácil automatización para extraer el ácido nucleico total de muestras de tejido fijadas en formalina y embebidas en parafina (Formalin-Fixed, Paraffin-Embedded, FFPE). Al usar la tecnología basada en esferas paramagnéticas de inmovilización reversible de fase sólida (Solid Phase Reversible Immobilization, SPRI), el sistema Agencourt FormaPure no requiere de filtración al vacío, centrifugación ni solventes orgánicos como fenol o xileno. Los investigadores pueden pasar de la asimilación de parafina a la extracción del ácido nucleico total en alrededor de cuatro horas (sin configuración) para 96 muestras en un formato multipocillo utilizando la estación de trabajo Biomek NXP o FXP Span-8 de Beckman Coulter. Las recuperaciones son sistemáticamente más altas que las técnicas de la competencia.

FormaPure RNA Workflow Steps

Product Features

  • Rendimiento y pureza constantes y superiores del ARN o ácido nucleico total
  • Sin centrifugación, filtración al vacío ni solventes
  • Admite el procesamiento automatizado o manual

Aplicación: Aislamiento de ARN total o ácido nucleico total a partir de muestras de tejido FFPE

Técnicas de aplicación posteriores: qRT-PCR, análisis de micromatriz

Descripción general del proceso

A - B. Digestión de tejido y liberación de ácidos nucleicos. 1. Unión de los ácidos nucleicos a las esferas magnéticas 2. Separación de las esferas 3. Lavado de los productos capturados con etanol 70 % 4. Lavado con isopropanol para eliminar las sustancias contaminantes 5. Lavado con etanol 70 % 6. Elución de los ácido nucleicos de las partículas magnéticas

Recuperación de ácido nucleico fragmentado

La fijación de las muestras de tejido en formaldehído puede producir el enlace cruzado amplio de los componentes del tejido. La calidad del ácido nucleico variará en función de diversos factores, incluida la manera en que se llevó a cabo el proceso de fijación en formalina, la antigüedad de la muestra, las condiciones de almacenamiento, etc. Como se observa en la Figura 1, el ácido nucleico de diversos tipos y antigüedades de muestras FFPE se aisló usando el proceso Agencourt FormaPure y se amplificó correctamente mediante PCR.

Recuperación de ácido nucleico

Figura 1. El ácido nucleico total se aisló a partir de secciones de 5 micrones para cada tejido. El volumen de elución fue de 40 µl. Se utilizaron 2 µl de producto eluído en una reacción PCR de 20 µl (45 ciclos) para amplificar una región de 300 bp del gen GAPDH. Una muestra de 10 µl se sometió a electroforesis en un gel de agarosa 2 %. El carril 9 contiene el control negativo. El carril 10 contiene una escalera de 1 kb.

Pureza constante del ARN

 

Rat Lung
Replicates
OD
260/280
OD
260/230
RNA
Concentration
(ng/µL
µL
Amount
(Ug)
1 1,79 1,21 288,99 35,00 10,11
2 1,83 1,14 439,80 35,00 15,39
3 1,79 1,07 538,57 35,00 18,85
4 1,80 1,10 629,80 35,00 22,04
5 1,80 1,06 513,13 35,00 17,96

Tabla 1. Datos del sitio beta para el ARN purificado a partir de tejidos de pulmón de rata FFPE usando Agencourt FormaPure. Se usó una sección de 10 micrones para cada replicación.

Pureza del ARN

Figura 2. Trazas de bioanalizador Agilent de ARN preparado a partir de varios tejidos de pulmón de rata FFPE utilizando el sistema Agencourt FormaPure. Todas las muestras fueron tratadas con ADNasa I.

Resumen

El sistema Agencourt FormaPure puede extraer el ácido nucleico total y el ARN total, y ofrece rendimiento y pureza superiores en un proceso apto para automatización. Esta tecnología puede purificar los ácidos nucleicos de una amplia variedad de tipos de tejidos para su utilización en técnicas tales como la genotipificación SNP, la expresión génica y la secuenciación. Con la utilización de esferas paramagnéticas, no se necesita centrifugación, filtración al vacío ni solventes químicos. El sistema Agencourt FormaPure, junto con la estación de trabajo Biomek NXP o FXP Span-8 de Beckman Coulter, ayuda a responder las preguntas biológicas más amplias de la actualidad.

Agencourt FormaPure RNA Reagent Kits

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Product Specifications

Application Uses RNA Isolation, RNA Extraction, RNA Sequencing, Nucleic acid sample prep
Format Liquid
Starting Sample Material FFPE (formalin fixed paraffin embedded) tissue.
Nucleic Acid Sample RNA
Automated Available Yes
Item Specifications Referenced C19158

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