Resultados y datos de GenFind V3

Aislamiento de ADN genómico de sangre y suero

El kit GenFind V3 es un kit de reactivos de aislamiento de ADN genómico (ADNg) construido con tecnología basada en esferas paramagnéticas de SPRI. Permite la purificación de ADNg compatible con PCR de sangre fresca y congelada recogida en tubos con contenido de anticoagulantes como EDTA, citrato o heparina. Se puede ejecutar el método manualmente en formato de tubo de 2 ml o en formato de 96 pocillos, o automatizarse en formato de 96 pocillos en diversas estaciones de trabajo de manipulación de líquidos Biomek de Beckman Coulter. Recuperación consistente de ADNg de varios tipos de muestras de sangre fresca y congelada en comparación con otros proveedores.

  • Pureza y calidad óptimas y consistentes del ADNg aislado
  • Sin arrastre de inhibidores de diversos anticoagulantes para ensayos de PCR y otros posteriores excepcionales
  • Procesa hasta 400 μl de sangre fresca o congelada

Recuperación y pureza competitivas del ADNg

El ADN genómico se extrajo de 200 μl de sangre fresca o congelada recogida en tubos que contenían heparina, EDTA o citrato con GenFind V3 y kits de otros proveedores. En la Figura 1, las muestras se cuantificaron con el kit de ensayo de ADN Quant-It, Picogreen y NanoDrop (Thermo Fisher Scientific) para obtener el rendimiento del ADN. Se recuperaron mayores cantidades ADNg con el kit GenFind V3 que con los kits de otros proveedores en un tipo de tubo de recogida de sangre y los rendimientos competitivos se recuperaron en los otros dos tipos de tubos. En la Figura 2, se accedió a las muestras para determinar la pureza utilizando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). Para todos los tipos de muestras de sangre fresca y congelada, GenFind V3 purificó el ADNg con unas proporciones de A260/280 satisfactorias.

Rendimiento del ADNg con GenFind V3

Figure 1

Pureza del aislamiento de ADN con GenFind V3

Figure 2

 

Pureza mejorada del ADNg con GenFind V3

El ADN genómico se extrajo de 200 μl de sangre fresca o congelada recogida en tubos que contenían heparina, EDTA y citrato con GenFind V3, GenFind V2 y tres kits de otros proveedores. Se accedió a las muestras para determinar la pureza utilizando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). Para cada tipo de tubo, GenFind V3 extrajo ADNg con una mayor pureza que GenFind V2 y los kits de otros proveedores.

Datos de pureza del ADN con GenFind V3

Figure 3

Aumente el rendimiento con un aumento del volumen de entrada de sangre

El aumento del volumen de entrada puede aumentar los rendimientos totales sin afectar a la pureza. El ADN genómico se extrajo de 400 μl de sangre fresca recogida en tubos que contenían EDTA con GenFind V3. Se accedió a las muestras para determinar la pureza y el rendimiento utilizando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific).

Datos de rendimiento del ADN con GenFind V3

Figure 4

Pureza del aislamiento de ADN de sangre con GenFind V3

Figure 5

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Sin arrastre de inhibidores para PCR y aplicaciones posteriores excepcionales

La capacidad de la PCR se evaluó mediante qPCR utilizando un conjunto de cebadores (cebador de avance 5'-ggacttcgagcaagagatgg-3' y cebador inverso 5'-agcactgtgttggcgtacag-3') diseñado para abarcar los exones 4 y 5 del gen beta (β) actina (ActB) para producir 327 amplicones de pares de bases. La Figura 6 muestra el gráfico de amplificación de 10 ng de ADN extraído de tubos que contenían citrato, EDTA o heparina. Para todos los tipos de tubos obtenemos una amplificación del ADN que indica que no hay arrastres de inhibidores de la PCR para ninguno de los anticoagulantes. La Figura 7 muestra el gráfico de amplificación de 10 ng de ADN extraído de tubos congelados que contenían citrato utilizando GenFind V3 y GenFind V2.

Aislamiento de ADN de sangre completa fresca con GenFind V3

Figure 6

Aislamiento de ADN de sangre completa congelada con GenFind V3

Figure 7

Alta recuperación de ADN de peso molecular alto

GenFind V3 aísla ADNg de alta calidad. El ADN genómico aislado de varias muestras de sangre recogidas en tubos de heparina, EDTA y citrato se analizó en la cinta de detección de ADN genómico Agilent para evaluar la calidad. En la imagen de la derecha, los valores DIN de todas las muestras que se aislaron con GenFind V3 fueron todos ≥9,0, lo que indica que se recuperó ADNg intacto y de alta calidad. El ADN que se aisló utilizando el kit del proveedor A fue de menor calidad, lo que se indica con una puntuación DIN de 7,8. Las Figura 9 y Figura 10 muestran los gráficos de las muestras de ADN genómico que se aislaron de los tubos que contenían heparina y citrato. 

 

Datos de rendimiento del aislamiento de ADN con GenFind V3

Figure 9

Datos e información de rendimiento de GenFind V3

Figure 10

 

Flujo de trabajo visual

Flujo de trabajo de GenFind V3 para el aislamiento de ADN de sangre

1. Lisar la sangre completa o el suero en tampón de lisis y proteinasa K
2. Unir el ADN a las esferas magnéticas
3. Separar las esferas de los contaminantes
4. Lavar las esferas magnéticas con el tampón de lavado 1 para eliminar los contaminantes
5. Lavar las esferas magnéticas con el tampón de lavado 2 para eliminar los contaminantes
6. Eluir el ADN de las esferas magnéticas
7. Transferir a la nueva placa para almacenamiento

Menos tiempo de trabajo con menos acciones de pipeteo

La Figura 11 representa el tiempo de trabajo para extraer ADNg para 1 a 96 muestras utilizando GenFind V3 o un proveedor basado en columnas. Incluso a 10 muestras, el tiempo de trabajo para extraer ADN de la sangre es más rápido utilizando GenFind V3. La Figura 12 muestra el número total de acciones de pipeteo necesarias para 1, 8, 24, 48 y 96 muestras. Las acciones de pipeteo incluyen dispensar la muestra, mezclar la muestra y descartar el sobrenadante. Con la capacidad de utilizar una pipeta multicanal, hay menos acciones de pipeteo que deban tener lugar en 24 o más muestras que con los proveedores basados en columnas.

Tiempo de trabajo de GenFind V3

Figure 11

Acciones de pipeteo para aislamiento de ADN con GenFind V3

Figure 12

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Productos para el aislamiento de ADN de la sangre

El kit de reactivos GenFind V3 está disponible en 2 tamaños de kit según sus necesidades de rendimiento. Póngase en contacto con su representante de ventas local o visite nuestra página de productos para solicitar un presupuesto.

N.º DE PIEZA NOMBRE PREPARACIONES
C34880 GenFind V3 50
C34881 GenFind V3 384

 

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