Rendimiento y datos de RNAdvance Tissue

Extracción de ARN total de tejidos

El kit RNAdvance Tissue es un kit de reactivos de aislamiento de ácido ribonucleico (ARN) construido con tecnología basada en esferas paramagnéticas de SPRI. Permite la extracción de ARN total de una amplia variedad de tejidos sin los riesgos y problemas de eliminación de residuos de disolventes orgánicos ni los pasos laboriosos y lentos de los procedimientos de filtración por vacío y centrifugación. La extracción se puede ejecutar manualmente en formato de tubo de 2 ml o en formato de 96 pocillos, o automatizarse en formato de 96 pocillos en diversas estaciones de trabajo de manipulación de líquidos Biomek de Beckman Coulter. Este proceso de extracción produjo una mayor recuperación de ARN total que los enfoques tradicionales basados en columnas en los experimentos realizados para los datos que se muestran a continuación.

  • Compatible con aplicaciones posteriores basadas en PCR
  • Extracción y purificación de ARN de alta calidad de muchos tipos de tejido
  • Eliminación eficiente de ADN genómico y otros contaminantes

 

Alta recuperación de ARN de una variedad de tipos de tejido sin sacrificar la pureza

Genómica RNAdvance Tissue Rendimiento del ARN total

Figure 1

Genómica RNAdvance Tissue Pureza del ARN total

Figure 2

El ARN se extrajo de 10 mg de tejido cerebral, hepático, pulmonar, renal o de cola utilizando RNAdvance Tissue y otros kits comercialmente disponibles. En la Figura 1 (arriba), se cuantificó el rendimiento del ARN utilizando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). RNAdvance Tissue recuperó mayores cantidades de ARN de los cinco tipos de tejido utilizados que los otros kits disponibles comercialmente. En la Figura 2 (arriba), se accedió a las muestras para determinar la pureza utilizando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). Para todos los tipos de tejido, RNAdvance Tissue purificó el ARN con proporciones A260/280 satisfactorias.

 

Calidad de ARN destacable

El ARN extraído de 10 mg de tejido cerebral utilizando RNAdvance Tissue se procesó en el chip del bioanalizador Agilent 2100 Eukaryote Total RNA Nano. En las Figuras 3 y 4 siguientes se muestran dos gráficos de ARN extraído de tejido cerebral. Las puntuaciones RIN fueron >9, lo que indica que se recuperaron ARN intactos y de alta calidad.

Genómica RNAdvance Tissue Puntuación RIN Figura 3

Figure 3

Genómica RNAdvance Tissue Puntuación RIN Figura 4

Figure 4

 

RNAdvance Tissue proporciona ARN apto para aplicaciones de PCR posteriores

La amplificabilidad de la PCR se evaluó mediante qRT-PCR utilizando un conjunto de cebadores (cebador de avance 5’-gacttcgagcaagagatgg-3’ y cebador inverso 5'-agcactgtgttggcgtacag-3') diseñado para abarcar los exones 4 y 5 del gen beta (β) actina (ActB) para producir 327 amplicones de pares de bases. En la Figura 5 (abajo), el control no RT también demuestra la eliminación de ADN que puede interferir con las aplicaciones de ARN posteriores. En la figura 6 (abajo), el ARN aislado utilizando el kit RNAdvance Tissue era amplificable, indicando que el kit eliminó los inhibidores de la PCR. Estos resultados indican la posibilidad de uso del ARN para aplicaciones de PCR posteriores.

Genómica RNAdvance Tissue Puntuación RIN Figura 5

Figure 5

Genómica RNAdvance Tissue Puntuación RIN Figura 6

Figure 6

Extracción de ARN de las muestras en menos tiempo y con menos acciones de pipeteo en comparación con los usuarios de kits basados en columnas

La figura 7 (abajo) representa el tiempo total para extraer ARN de 1 a 96 muestras utilizando el kit RNAdvance Tissue o un kit basado en columnas. A 20 muestras, el tiempo total para extraer ARN de tejidos es menor utilizando el kit RNAdvance Tissue. En la Figura 8 (abajo), se destaca el número total de acciones de pipeteo, incluyendo dispensación en una muestra, mezcla de una muestra y eliminación de las puntas, requerido para 1, 8, 24, 48 y 96 muestras. Con la capacidad de utilizar una pipeta multicanal, hay significativamente menos acciones de pipeteo para más de 8 muestras que deban tener lugar que con los kits basados en columnas.

Genómica RNAdvance Tissue Tiempo total Figura 7

Figure 7

Genómica RNAdvance Tissue Acciones de pipeteo Figura 8

Figure 8

Flujo de trabajo visual de RNAdvance Tissue

Genómica RNAdvance Tissue Flujo de trabajo 

  1. Lisar el tejido en tampón de lisis y proteinasa K
  2. Unir el ARN a las esferas magnéticas
  3. Separar las esferas magnéticas de los contaminantes
  4. Lavar las esferas magnéticas con tampón de lavado y etanol al 70 % para eliminar los contaminantes
  5. Tratar las muestras con DNasa I
  6. Reunir el ARN a las esferas magnéticas con tampón de unión
  7. Lavar las esferas magnéticas con etanol al 70 % para eliminar los contaminantes
  8. Eluir el ARN de las esferas magnéticas
  9. Transferir a la nueva placa para almacenamiento

 

Para uso en métodos manuales o automatizados basados en el tamaño del lote o el rendimiento general

Tiempo de trabajo y tiempo total estimados en horas necesarios para realizar 8, 24 y 96 extracciones de ARN con RNAdvance Tissue. La extracción se puede ejecutar de forma manual o automatizada en un sistema de manipulación de líquidos. Los tiempos automatizados reflejan la extracción realizada en una estación de trabajo genómica multicanal 96 Biomek i5. Se indica la diferencia de tiempo entre los modos manual y automatizado (NR = no recomendado).

RNAdvance Tissue Manual Automatizado
Tamaño del lote 8 Tiempo de trabajo 0,08 0,25
Tiempo total 1,00 2,50
24 Tiempo de trabajo 0,11 0,25
Tiempo total 1,10 2,50
96 Sin tratamiento de DNasa Tiempo de trabajo NR 0,25
Tiempo total NR 2,00
96 Tiempo de trabajo NR 0,25
Tiempo total NR 2,50

 

Productos de RNAdvance Tissue para la extracción de ARN de tejido

RNAdvance Tissue está disponible en tres tamaños de kit según sus necesidades de procesamiento. Haga clic en el número de pieza específico que aparece a continuación para comprar o solicitar un presupuesto. Para obtener más información, consulte nuestra página de aislamiento de ARN de tejido con RNAdvance Tissue.

N.º DE PIEZA NOMBRE PREPARACIONES
A32645 Kit RNAdvance Tissue  50
A32649 Kit RNAdvance Tissue  96
A32646 Kit RNAdvance Tissue  384

 

 

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