Rendimiento y datos de RNAdvance Cell v2

Aislamiento y purificación de ARN total de células eucariotas cultivadas

El kit RNAdvance Cell v2 es un kit de reactivos de aislamiento de ácido ribonucleico (ARN) construido con tecnología basada en esferas paramagnéticas de SPRI. Permite la purificación de ARN de alta calidad de líneas celulares. La extracción se puede ejecutar manualmente en formato de tubo de 2 ml o en formato de 96 pocillos, o automatizarse en formato de 96 pocillos en diversas estaciones de trabajo de manipulación de líquidos Biomek de Beckman Coulter. El ARN total extraído utilizando el kit RNAdvance Cell v2 no contiene ADNg detectable ni otros inhibidores de la PCR.

  • Eliminación eficiente de ADN genómico y otros contaminantes
  • La extracción y purificación de ARN total de alta calidad de células cultivadas respalda la extracción de un gran número de muestras para expresión génica

 

Alta recuperación de ARN mediante RNAdvance Cell v2

El ARN se extrajo de células MRC-5 utilizando RNAdvance Cell v2 y kits de otros proveedores. En la Figura 1 (abajo), las muestras se cuantificaron utilizando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). Se recuperaron mayores cantidades de ARN utilizando el kit RNAdvance Cell v2 que de los tres kits de otros proveedores. En la Figura 2 (abajo), se accedió a las muestras para determinar la pureza utilizando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). Para las MRC-5, RNAdvance Cell v2 purificó ARN con proporciones A260/280 dentro de unos valores satisfactorios.

Genómica RNAdvance Cells Rendimiento y pureza

 

El ARN se puede extraer de una variedad de líneas celulares

El ARN se extrajo de 5 x 10 4 células MRC-5, ACHN, HCT116 y PANC1 utilizando RNAdvance Cell v2. Las muestras se cuantificaron y se accedió a las mismas para determinar la pureza utilizando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). El rendimiento del ARN depende de la línea celular, pero la calidad del ARN es consistente entre todas las líneas celulares y está dentro de las proporciones A260/280 satisfactorias.

Tipo de célula Rendimiento (µg) A260/A280
MRC-5 1,8 2,02
ACHN 0,5 1,98
HCT116 0,3 2,00
PANC1 1,0 1,93

 

Aislamiento de ARN de alta calidad con puntuaciones RIN promedio de 9,8 a partir de una variedad de líneas celulares

RNAdvance Cell v2 aísla ARN de alta calidad. El ARN total extraído de las células MRC-5, ACHN, HCT116 y PANC1 y el ARN de referencia humano universal (Agilent) se procesaron en la cinta de análisis de ARN (Agilent) para evaluar la calidad. En la Figura 3 (abajo), los valores de RIN de todas las muestras aisladas con RNAdvance Cell v2 fueron todos ≥9,4, lo que indica que se recuperaron ARN intactos y de alta calidad. En la figura 4 (abajo), se muestra un gráfico de la muestra de ARN aislado de células MRC-5 correspondiente al primer carril del gel; los picos de ARNr 18s y 28 s son prominentes.

Genómica RNAdvance Cells Puntuaciones RIN

 

La eliminación eficaz de los inhibidores de la PCR y el ADN genómico permite datos y resultados de calidad en las aplicaciones qRT-PCR

Genómica RNAdvance Cells Amplificación

Genómica RNAdvance Cells Amplificabilidad de PCR de qRTLa capacidad de la PCR se evaluó mediante qRT-PCR utilizando un conjunto de cebadores (cebador de avance 5'-ggacttcgagcaagagatgg-3' y cebador inverso 5'-agcactgtgttggcgtacag-3') diseñado para abarcar los exones 4 y 5 del gen beta (β) actina (ActB) para producir 327 amplicones de pares de bases. En la Figura 5 (arriba), el control no RT demuestra la eliminación de ADN que puede interferir con las aplicaciones de ARN posteriores. En la Figura 6 (arriba), el ARN aislado de las 4 líneas celulares utilizando el kit RNAdvance Cell v2 era amplificable, indicando que el kit eliminó los inhibidores de la PCR. En la Figura 7 (derecha), se utilizó el ARN extraído de células ACHN utilizando RNAdvance Cell v2 y kits de otros 3 proveedores en la qRT-PCR con y sin transcriptasa inversa añadida. RNAdvance Cell v2 y los proveedores A y B tuvieron una suficiente eliminación de ADN, pero el proveedor C tenía igual amplificación sin transcriptasa inversa que con transcriptasa inversa, indicando contaminación del ADN.

 

 

Flujo de trabajo visual

Genómica RNAdvance Cell v2 Flujo de trabajo

  1. Lisar las células en tampón de lisis y proteinasa K
  2. Unir el ARN a las esferas magnéticas
  3. Separar las esferas magnéticas de los contaminantes
  4. Lavar las esferas magnéticas con tampón de lavado y etanol al 70 % para eliminar los contaminantes
  5. Tratar las muestras con DNasa I
  6. Reunir el ARN a las esferas magnéticas con tampón de unión
  7. Lavar las esferas magnéticas con etanol al 70 % para eliminar los contaminantes
  8. Eluir el ARN de las esferas magnéticas
  9. Transferir a una nueva placa para almacenamiento

 

Extracción de ARN de las muestras en menos tiempo y con menos acciones de pipeteo en comparación con los usuarios de kits basados en columnas

Genómica RNAdvance Cells Tiempo total y mezcla de pipetas

La figura 8 (arriba) representa el tiempo total para extraer ARN de 1 a 96 muestras utilizando RNAdvance Cell v2 o un proveedor basado en columnas. A 30 muestras, el tiempo total para extraer ARN de células es más rápido utilizando RNAdvance Cell v2. En la Figura 9 (arriba), se destaca el número total de acciones de pipeteo, incluyendo dispensación en una muestra, mezcla de una muestra y eliminación de las puntas, requerido para 1, 8, 24, 48 y 96 muestras. Con la capacidad de utilizar una pipeta multicanal, hay significativamente menos acciones de pipeteo que deban tener lugar que con los proveedores basados en columnas.

 

Para uso en métodos manuales o automatizados basados en el tamaño del lote o el rendimiento general

Tiempo de trabajo y tiempo total estimados en horas necesarios para realizar 8, 24, 48 y 96 extracciones de ARN. Los métodos se pueden realizar de forma manual o automatizada en una Biomek i7 Hybrid. Se indica la diferencia de tiempo entre los modos manual y automatizado (NR = no recomendado).

RNAdvance Cell v2 Manual Automatizado
Tamaño del lote 8 Tiempo de trabajo 0,25 0,25
Tiempo total 1,15 2,43
24 Tiempo de trabajo 0,25 0,25
Tiempo total 1,30 2,50
48 Tiempo de trabajo NR 0,50
Tiempo total NR 2,86
96 Tiempo de trabajo NR 0,50
Tiempo total NR 3,08

 

Productos RNAdvance Cell v2 para el aislamiento de ARN de células

RNAdvance Cell v2 está disponible en dos tamaños de kit según sus necesidades de procesamiento. Haga clic en el número de pieza específico que aparece a continuación para comprar o solicitar un presupuesto. Para obtener más información, consulte nuestra página de aislamiento de ARN de células con RNAdvance Cell v2.

N.º DE PIEZA NOMBRE PREPARACIONES
A47942 Kit RNAdvance Cell v2  100
A47943 Kit RNAdvance Cell v2  960

 

 

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