Caracterización del vector vírico
La terapia celular y génica implica utilizar un vehículo de distribución génica para introducir un tratamiento en el organismo. Muchas empresas de terapia génica están trabajando con virus adenoasociados (Adeno-Associated Virus, AAV) como vehículo de distribución génica preferido. Los AAV son ideales porque estas cápsidas víricas vienen con un gran genoma intrínseco que se puede modificar para llevar una carga terapéutica. Los investigadores tienen que determinar en primer lugar qué porcentaje de sus cápsidas víricas están intactas y, luego, deben averiguar cuántos tipos de cápsidas víricas intactas están completas. Esta carga transgénica es fundamental para el éxito del tratamiento.
Es de particular importancia que los investigadores comprendan la carga vírica de estas partículas porque es improbable que las partículas víricas que no contienen el gen terapéutico objetivo produzcan actividad terapéutica, sino que estas partículas podrían producir reacciones adversas, como una respuesta alérgica. Los investigadores necesitan conocer la calidad y pureza de una preparación vírica determinada y muchos están recurriendo al ultracentrifugado analítico para obtener esta información.
La ejecución de un ultracentrifugado analítico proporciona un valor S, el coeficiente de sedimentación.
La terapia celular y génica implica utilizar un vehículo de distribución génica para introducir un tratamiento en el organismo. Muchas empresas de terapia génica están trabajando con virus adeno-asociados (Adeno-Associated Virus, AAV) como vehículo de distribución génica preferido. Los AAV son ideales porque las cápsides víricas pueden modificarse para llevar una carga terapéutica. Los investigadores tienen que determinar en primer lugar qué porcentaje de sus cápsides víricas están intactas y, luego, deben averiguar cuántos tipos de cápsides víricas intactas están completas. Esta carga transgénica es fundamental para el éxito del tratamiento.
Es especialmente importante para los investigadores conocer la carga vírica de estas partículas porque no es probable que las partículas víricas que no contienen el gen terapéutico diana completo produzcan actividad terapéutica, en cambio estas cápsides parciales pueden producir reacciones adversas, como una respuesta inmunogénica. Los investigadores necesitan conocer la calidad y pureza de una preparación vírica determinada y muchos están recurriendo al ultracentrifugado analítico para obtener esta información.
La solución para medir la homogeneidad del vector rAAV, la pureza (y más): analizar partículas víricas en solución.
Los vectores víricos adenoasociados recombinantes (Recombinant Adeno-Associated Viral Vectors, rAAV) podrían ser muy prometedores para las nuevas terapias génicas que salvan vidas.
Pero, aunque las técnicas clásicas como la dispersión de luz dinámica (Dynamic Light Scattering, DLS) o la cromatografía de líquidos de alto rendimiento (High Performance Liquid Chromatography, HPLC) pueden caracterizar la heterogeneidad y agregación de los rAAV, sencillamente no proporcionan suficiente resolución para cuantificar la homogeneidad y la carga de partículas víricas. Cuando se trata de producir preparaciones de vectores rAAV de calidad clínica, lograr mediciones de alta resolución siempre ha sido un obstáculo.
Como saben los investigadores en terapia génica, con tanto en juego en las primeras fases del desarrollo de productos, es fundamental actuar rápidamente. La adopción del ultracentrifugado analítico hace posible producir vectores rAAV de calidad clínica, a diferencia de las otras tecnologías habituales.
¿El principal obstáculo? Falta de una técnica cuantitativa de alta resolución para controlar la calidad terapéutica con respecto a:
- Homogeneidad
- Pureza
- Consistencia del producto
- Plenitud vírica
La solución ideal: análisis en solución con ultracentrifugado analítico (UCA).
Como han descubierto científicos como los de Genethon, al permitir el análisis sin matriz de preparaciones de vectores de rAAV —independientes del serotipo y del transgén—, la UCA les ayuda a:
- Determinar el estado del ensamblaje vírico o la homogeneidad
- Cuantificar empíricamente la agregación
- Determinar la contaminación de las subpartículas
- Cuantificar la masa para medir con precisión la carga genética
Vea este seminario web para saber cómo han utilizado la UCA Christine LE BEC y su equipo de Genethon con el fin de caracterizar con éxito los vectores scAAV y ssAAV, incluida la homogeneidad y la carga de partículas víricas.
Productos para caracterizar vectores víricos
Optima AUC
La ultracentrífuga analítica de nueva generación utilizada con frecuencia en el control de calidad de vectores víricos para cuantificar la carga porcentual en las cápsidas de AAV