Aislamiento de ADN y ARN de tejidos o células

Con el avance de la secuenciación de nueva generación (NGS), los investigadores ahora pueden acceder a los datos genómicos y transcriptómicos de una única muestra. La capacidad de aislar ADN y ARN de alta calidad de una única muestra biológica es cada vez más importante, especialmente cuando la muestra produce pequeñas cantidades de ácidos nucleicos totales. Los miembros del equipo PoP han desarrollado un protocolo utilizando reactivos Beckman Coulter para aislar ADN y ARN de las mismas muestras de tejido y de células cultivadas. El método utiliza un tampón patentado para unir de forma selectiva el ARN y el ADN y eliminar la necesidad de dividir un lisado antes de la unión y el lavado de la muestra de ácido nucleico.

Protocolos:

Extracción simultánea de ADN y ARN de células cultivadas sin dividir el lisado

Extracción simultánea de ADN y ARN de tejido sin dividir el lisado

Extracción de ADN de células de linfocitos T humanos

El ADN y el ARN se extrajeron de un número creciente de células de linfocitos T humanos (Jurkat): 10 000, 50 000, 100 000 y 500 000. El rendimiento del ADN y el ARN se midió mediante el ensayo de ADNbc Quant-It™ PicoGreen® y el ensayo de ARN RiboGreen® (Thermo Fisher Scientific) (Figura 1). El rendimiento promedio fue de 171 ng de ADN y de 94 ng de ARN para 10 000 células; el rendimiento promedio fue de 7 µg de ADN y de 4 µg de ARN para 500 000 células. La producción de ADN y ARN aumentaron en función del número de células (Figura 1).

 

Genómica POP Aislamiento de ADN y ARN de células y tejidos Figura 1

Figure 1

 

Se obtuvo ácido nucleico de alta integridad utilizando este protocolo según se evaluó en un ensayo de cinta de detección Agilent: Puntuaciones DIN superiores a 9,0 y puntuaciones RIN superiores a 9,2 (Figura 2 y Figura 3). El ARN y ADN extraídos de 10 000 células mostraron una integridad del ácido nucleico inferior (DIN 6,7 y RIN 8,0) debido a la concentración del ácido nucleico por debajo del intervalo de cuantificación del ensayo de cinta de detección.

 

Genómica POP Aislamiento de ADN y ARN de células y tejidos Figuras 2 y 3

 

Extracción de ADN de tejido hepático de ratón congelado

El ADN y ARN se extrajeron de tejidos hepáticos de ratón congelados. El rendimiento del ADN y ARN se midió mediante el ensayo de ADNbc Quant-It™ PicoGreen® y el ensayo de ARN RiboGreen® (Thermo Fisher Scientific) (Figura 1). En este experimento, el rendimiento promedio de 10 mg de tejido hepático de ratón fue de 32 µg de ADN y 66 µg de ARN (Figura 4).

 

Genómica POP Aislamiento de ADN y ARN de células y tejidos Figura 4

Figure 4

 

La integridad de los ácidos nucleicos se evaluó en un ensayo de cinta de detección Agilent. Las puntuaciones DIN y RIN resultantes indican ADN y ARN altamente intacto: DIN 9,2 y RIN 7,4 (Figura 5 y Figura 6).

 

Genómica POP Aislamiento de ADN y ARN de células y tejidos Figuras 5 y 6

 

 

Beckman Coulter no ofrece garantías de ningún tipo, expresas o implícitas, con respecto a este protocolo, incluyendo, entre otras, las garantías de idoneidad para un propósito particular o de comerciabilidad o de que el protocolo no sea infringente. Todas las garantías están expresamente rechazadas. Su uso del método es exclusivamente bajo su propio riesgo, sin recurrir a Beckman Coulter. No está destinado ni se ha validado para su uso en el diagnóstico de enfermedades u otras afecciones. Este protocolo es para demostración solamente y no está validado por Beckman Coulter.

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