Aislamiento de ADN de enjuague bucal y saliva

El enjuague bucal y la saliva son formas no invasivas de recoger células humanas para el análisis genómico. Tanto el enjuague bucal como la saliva contienen células epiteliales bucales y glóbulos blancos, que proporcionan una riqueza de datos genéticos. Varias empresas tienen sus propios kits para recoger saliva y conservarla durante largos periodos de tiempo. Otro método para recoger células epiteliales bucales y glóbulos blancos es el enjuague bucal. Dado que los pacientes están familiarizados con el uso del enjuague bucal, el error de muestreo está limitado en comparación con métodos similares, como el esputo y los hisopos bucales. A continuación se muestran dos protocolos desarrollados por los miembros del equipo PoP de Beckman Life Sciences para clientes específicos y los datos de cuando se utilizaron los protocolos.

Protocolos:

Extracción de ADN del kit de recogida de muestras de ADN de saliva Zeesan utilizando GenFind V3

Extracción de ADN del enjuague bucal utilizando GenFind V3

Extracción de ADN de saliva recogida en el kit de recogida de muestras de ADN de saliva Zeesan

Se aisló ADN genómico (ADNg) de tres donantes sanos utilizando el kit de recogida de muestras de ADN de saliva Zeesan. El rendimiento del ADN se midió mediante el ensayo de ADNbc Quant-It™ PicoGreen™ (ThermoFisher). Se extrajo un promedio de 10,3 μg de ADNg de 300 μl de saliva [Figura 1]. La barra de error representa la desviación estándar de tres réplicas de donantes.

 

Genómica PoP Aislamiento de ADN de enjuague bucal y saliva Figura 1

Figure 1

 

Se accedió a la pureza en un NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). La proporción A260/280 promedio fue de 1,9 y la A260/230 promedio fue mayor que 2,0 [Figura 2]. La barra de error representa la desviación estándar de tres réplicas de donantes.

 

Genómica PoP Aislamiento de ADN de enjuague bucal y saliva Figura 2

Figure 2

 

La integridad del ADN se evaluó utilizando el ensayo de la cinta de detección de ADN genómico Agilent. Las puntuaciones DIN promediaron 7,8 y el tamaño pico del ADN fue mayor que 55 K, lo que indica que el ADNg extraído se encuentra en gran parte intacto [Figuras 3 y 4].

 

Genómica PoP Aislamiento de ADN de enjuague bucal y saliva Figuras 3 y 4

Extracción de ADN de muestras de enjuague bucal

Se administró 15 ml de enjuague bucal con alcohol al 12,25 % a 5 adultos. Debido a la variación biológica inherente, se agruparon tres muestras para proporcionar réplicas técnicas. Las otras 2 muestras se procesaron individualmente. Para evaluar el rendimiento y la pureza se utilizó un NanoDrop (Thermo Fisher Scientific) (Figura 5). Las réplicas técnicas dieron un rendimiento promedio de 1,8 µg. Las purezas de todas las muestras, agrupadas e individuales, dieron proporciones de absorbancia suficientes para la mayoría de las aplicaciones posteriores (Figura 6). Las proporciones A260/A230 son suficientes dadas las altas cantidades de carbohidratos en las muestras de saliva.

 

Genómica PoP Aislamiento de ADN de enjuague bucal y saliva Figuras 5 y 6

 

La integridad del ADN genómico (ADNg) se evaluó en una cinta de detección de ADN genómico Agilent (Agilent) (Figura 7). A continuación se muestra el electroferograma de una de las muestras agrupadas. La puntuación DIN fue de 8,1, lo que indica una gran proporción de ADN intacto.

 

Genómica PoP Aislamiento de ADN de enjuague bucal y saliva Figura 7

Figure 7

 

 

Beckman Coulter no ofrece garantías de ningún tipo, expresas o implícitas, con respecto a este protocolo, incluyendo, entre otras, las garantías de idoneidad para un propósito particular o de comerciabilidad o de que el protocolo no sea infringente. Todas las garantías están expresamente rechazadas. Su uso del método es exclusivamente bajo su propio riesgo, sin recurrir a Beckman Coulter. No está destinado ni se ha validado para su uso en el diagnóstico de enfermedades u otras afecciones. Este protocolo es para demostración solamente y no está validado por Beckman Coulter.

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