Aislamiento de ADN de hisopos bucales

Los hisopos bucales son una forma no invasiva de recogida de muestras de ADN humano. Varias empresas producen hisopos bucales y cada una recomienda métodos distintos de recogida, como los aplicadores con punta de poliéster Puritan (PN 25-806-2PD) con los que se recomienda frotar el interior de la mejilla con dos hisopos diferentes. A continuación se muestran un protocolo desarrollado por los miembros del equipo PoP de Beckman Life Sciences para clientes específicos y los datos de cuando se utilizaron los protocolos con Puritian y Copan FLOQSwabs™ (PN 50E011E01). Se utilizaron ambos hisopos para asegurar que ambas marcas se puedan extraer usando el mismo protocolo.

Protocol (Protocolo):

Aislamiento de ADN de hisopos bucales utilizando el kit DNAdvance

Extracción de ADN de los hisopos bucales Puritian y Copan FLOQSwabs™

Los bastoncillos de poliéster Puritan y Copan FLOQSwabs™ se humedecieron en la lengua y luego se frotaron diez veces en cada mejilla de tres donantes sanos. Para procesar ambos hisopos Puritan en un único pocillo, se aumentó el volumen del tampón de lisis para cubrir por completo las cabezas de ambos hisopos. Si las cabezas de los hisopos no se cubren con tampón de lisis, los rendimientos de ADN son menores y menos consistentes. Los reactivos posteriores se escalaron para trabajar con los volúmenes más grandes de tampón de lisis.

Dos hisopos de poliéster Puritan dieron como resultado más de 1 µg de ADN con concentraciones que oscilaron entre ~20 y 50 ng/μl (Tabla 1). Un único Copan FLOQSwabs™ dio como resultado un rendimiento levemente menor, con concentraciones de ~10 a 25 ng/μl y un rendimiento total superior a 450 ng (Tabla 1, Figura 1). Se observó poca contaminación de proteínas, con valores 260/280 de 1,6 a 1,7 (Tabla 1).

Muestra Concentración (ng/μl) Pureza (260/280) Rendimiento (µg)
Copan FLOQSwabs™ 1 7,855 1,6 0,47
Copan FLOQSwabs™ 2 24,91 1,6 1,5
Copan FLOQSwabs™ 3 18,36 1,7 1,1
Puritan 1 17,99 1,7 1,1
Puritan 2 52,46 1,6 3,1
Puritan 3 31,23 1,6 1,9

 

Genómica POP Aislamiento de ADN de hisopos bucales

 

 

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