DRAQ7 posee numerosas aplicaciones y es altamente compatible con los protocolos existentes en una amplia gama de plataformas de instrumentación.

  • Tinción rápida de ADN bicatenario/núcleos de células muertas o permeabilizadas
  • Combinación con tintes de células vivas para discriminación de células muertas/vivas
  • Fácil de usar: sin lavado, no se necesita RNasa
  • Ideal para usar con marcadores GFP y FITC - DRAQ7 se activa en la región de rojo lejano
  • DRAQ7 es una contratinción de ADN de rojo lejano ideal para IF/IHC, cribado de alto contenido y ensayos basados en células.

Características espectrales:

  • Emisión de fluorescencia desde 665 nm en el infrarrojo de baja frecuencia
  • Los filtros de emisiones óptimas sugeridos incluyen 695 LP, 715 LP o 780 LP
  • Compatible ópticamente con los citómetros de escaneo láser y de flujo para sobremesa y con microscopios confocales epifluorescentes y no UV
  • Excitación útil en longitudes de onda subóptimas desde las líneas de 488 nm, 568 nm y 633 nm, más la excitación óptima en 647 nm. Sin excitación UV, a diferencia del yoduro de propidio.
  • No se necesita compensación con las combinaciones habituales de FITC/GFP + PE en la citometría de flujo. Se puede combinar con muchos tipos de tintes de células vivas.
  • Permite la citometría/imágenes multilínea cuando se combina con fluorocromos de rango visible y UV.
  • Sin realce de fluorescencia evidente tras la unión al ADN.
  • Normalmente no se observa fotoblanqueo.

Perfil espectral:

Los gráficos a continuación muestran la absorbancia estándar y el espectro de emisión de fluorescencia para DRAQ7 en una solución acuosa para un intervalo de diferentes longitudes de onda de excitación. Como se puede observar, DRAQ7 puede excitarse efectivamente usando sistemas de 488 nm. En estos casos, recomendamos usar un filtro pasabanda extenso, a fin de capturar la mayor cantidad posible de fotones emitidos.

Excitación:

  • Línea 633 y 647 nm óptimo (Exλmáx 599/644 nm)
  • Líneas 488, 514 y 568, subóptimo (solo por citometría de flujo)

Emisión:

  • >665 nm a >800 nm infrarrojo (Emλmáx 678 nm/694 nm intercalado con ADN bicatenario)
  • Superposición mínima con intervalo visible; p. ej., GFP y FITC
  • Los filtros de emisión pueden incluir 695 LP, 715 LP, 725 BP 20 o 780 LP.

DRAQ7 ingresa y marca solo las células con membrana alterada.

Los datos de la citometría de flujo a continuación muestran la apoptosis (membranas alteradas que permiten el ingreso de DRAQ7) de células Jurkat humanas expuestas a estauroporina 0,1 - 2,0 µM durante 24 h en comparación con los controles negativos.

DRAQ7 puede utilizarse en los análisis de citometría de flujo para marcar células con membrana afectada en combinación con reactivos tales como Annexin V, sondas de membrana mitocondrial y otros informantes de muerte celular. Los tintes de ADN impermeantes de células vivas e intactas comúnmente se combinan con Annexin V (que informa la inversión de la membrana) para brindar información sobre la progresión de la apoptosis. Como se muestra en la figura a continuación, DRAQ7 (serie superior y del medio) actúa de una manera equivalente al yoduro de propidio (PI, serie inferior) para informar el inicio de la filtración de la membrana causada por el aumento de las dosis de VP-16. Además, DRAQ7 ofrece nuevas posibilidades como tinte de rojo lejano de enlace a ADN sin realce. Usando la visualización logarítmica y lineal, se pueden identificar subpoblaciones diferenciadas. Además, a diferencia de PI, DRAQ7 permitirá medir varios parámetros de fluorescencia en paralelo; 4 con excitación de láser azul.

DRAQ7 puede usarse en ensayos de apoptosis, ensayos de citotoxicidad, análisis de anticuerpos citolíticos y ensayos de salud celular.

Debido a su señal de emisión en el rojo lejano, DRAQ7 puede combinarse fácilmente con muchos otros fluoróforos; hasta 4 usando la única fuente de excitación de 488 nm (láser de ion de argón).