¿Son los kits de reactivos y/o microfiltración alternativas eficaces a la ultracentrifugación diferencial para el aislamiento de exosomas?

FAQs об исследованиях

En términos generales, la ultracentrifugación es el "estándar de referencia" para el aislamiento de los exosomas, mientras que otros métodos son más recientes y menos adoptados a nivel general. Los kits de reactivos de aislamiento generalmente se basan en el enriquecimiento basado en inmunofenotipos de la muestra de exosomas, que requiere que los anticuerpos se unan a las proteínas de superficie del exosoma.2 Los anticuerpos suelen unirse a las esferas, lo que permite el aislamiento rápido y basado en densidad de los exosomas unidos a las esferas. Estos equipos ofrecen la ventaja de proporcionar resultados mucho más rápidos sin necesidad de equipos costosos ni de conocimientos técnicos, aunque muchos fabricantes de equipos no han revelado ni validado su modo de acción.

¿Qué método es más eficaz para purificar exosomas? En última instancia, el “mejor” método para el aislamiento de exosomas es el que mejor funcione con sus muestras, en su laboratorio y en sus manos. No hay una respuesta única.3 

Un ejemplo: para la elaboración de perfiles de miRNA exosómicos en suero, un kit de reactivos de aislamiento disponible en el mercado puede aislar exosomas con la misma eficacia que la ultracentrifugación. Otros investigadores han informado de resultados contradictorios cuando se utilizan kits de reactivos de aislamiento para diferentes protocolos y análisis posteriores.1 En un estudio, se aislaron más exosomas utilizando la ultracentrifugación con un kit de reactivos, pero el aislamiento de exosomas de mayor calidad con estructuras morfológicas intactas se logró con la ultracentrifugación con un gradiente de densidad (y sin kit de reactivos).

Del mismo modo, algunos investigadores informan de que no hay diferencias significativas en el uso de la ultrafiltración con ultracentrifugación diferencial,4 mientras que otros describen cómo la ultrafiltración dio como resultado una mayor recuperación de partículas <100 nm (indicando exosomas) en comparación con el uso de solo la ultracentrifugación.4 Como sucede con muchos aspectos de la investigación de exosomas, se necesita más estudio.


[1] Van Deun J, Mestdagh P, Sormunen R, et al. The impact of disparate isolation methods for extracellular vesicles on downstream RNA profiling. J Extracell Vesicles. 3; 24858: (2014). doi: org/10.3402/jev.v3.24858.

[2] Rekker K, Saare M, Roost AM, et al. Comparison of serum exosome isolation methods for microRNA profiling. Clin Biochem. 47(1-2); 135–138: (2014). doi: org/10.1016/j.clinbiochem.2013.10.020.

[3] Yamada T, Inoshima Y, et al. Comparison of Methods for Isolating Exosomes from Bovine Milk. J. Vet. Med. Sci. 74(11); 1523–1525: (2012). doi: 10.1292/jvms.12-0032.

[4] Lobb RJ, Becker M, Wen SW, et al. Optimized exosome isolation protocol for cell culture supernatant and human plasma. J Extracell Vesicles. 4; 27031: (2015). doi: org/10.3402/jev.v4.27031.