Aislamiento y separación de ADN y ARN de una única muestra de cultivo celular o tejido

Tipo de contenido: Póster
Autores: Dr. Han Wei; Dra. Lauren Saunders; Dra. Brittany Niccum; Antonia Hur; Asmita Patel

Introducción

Comprender el transcriptoma y el genoma de cualquier organismo depende de la secuenciación precisa del ARN y ADN de un organismo.

Las tecnologías actuales se basan en dividir una mezcla de muestras en dos después o antes de la lisis. En efecto, esto solo permite que la mitad del ARN o ADN total esté disponible para aislamiento y requiere un tamaño de muestra grande o dos grupos de muestras separadas.

Para superar este reto, actualmente estamos desarrollando un producto utilizando tecnología patentada a base de esferas que une de forma selectiva el ADN a las esferas para luego separar de manera efectiva el ADN y el ARN de forma independiente. Esto permite la extracción de todos los ácidos nucleicos a partir de una única configuración experimental.

Flujo de trabajo versátil para una variedad de tipos de muestras

Póster genómico Flujo de trabajo para diversos tipos de muestras

  • Se ha demostrado la extracción con muestras de tejido y células
  • La extracción se está optimizando para tipos de muestras adicionales
  • Nuestro equipo de científicos de Prueba de principios puede ayudarle a adaptar este flujo de trabajo a su tipo de muestra

AMPure XP como herramienta para extracción de ácidos nucleicos

Beckman Coulter Life Sciences ofrece una variedad de kits de extracción basados en la misma tecnología que AMPure XP. Estos productos químicos se pueden personalizar a sus necesidades de extracción de ADN y ARN.Póster genómico Variedad de kits de extracción

  • Las esferas no se atascan como puede suceder en las columnas con muestras viscosas
  • Más suave con el ácido nucleico, ya que no se tiene que extraer a través de las columnas
  • Los flujos de trabajo son sencillos y se pueden adaptar para muchos tipos de muestras diferentes

Muestra de tejido

Póster genómico Rendimiento del tejidoEl ADN y el ARN se aislaron de 10 mg de tejido hepático de ratón mediante unión selectiva de ADN. El rendimiento del ácido nucleico se estimó utilizando el kit de análisis de ADN Quant-iT (Thermo Fisher Scientific). El tamaño de ADN y ARN se visualizó en la cinta de detección de ADN genómico Agilent y en la tapa de detección de ARN.

  • El rendimiento de ADN fue de 32 μg en promedio, el rendimiento de ARN fue de 66 μg en promedio a partir de tres réplicas técnicas
  • Los tamaños de ADN promediaron >60 000 pb y se observaron dos picos de rARN prominentes en la fracción de ARN

Póster genómico Tejido de ADN

Póster genómico Tejido de ARN

Muestra de cultivo celular

Póster genómico Muestra de cultivo celularEl ADN y el ARN se aislaron de las crecientes cantidades de células.

  • El rendimiento tanto de ADN como de ARN aumentó linealmente con la entrada de células
  • Las puntuaciones DIN y RIN de ADN y ARN aisladas de 50 000, 100 000 y 500 000 células fueron consistentes y superiores a 9; indicando que el ADN y el ARN estaban intactos
  • La concentración de ácidos nucleicos de 10 000 fue demasiado baja para una medición precisa

Póster genómico Rastros de ADN Muestra de cultivo celular

Póster genómico Rastros de ARN Muestra de cultivo celular

Número de células Puntuación DIN (integridad del ADN) Puntuación RIN (integridad del ARN)
50 000 9,2 9,5
100 000 9,0 9,2
500 000 9,1 9,4

 

 

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