¿Por qué utilizar un colorante de viabilidad?

Las células muertas se unen a los anticuerpos de manera no específica, lo que sesga los cálculos positivos porcentuales. Las células muertas también aumentan en autofluorescencia, interfiriendo con la detección de señales específicas.  La selección de células muertas debe completarse antes del análisis de población mediante selección secuencial.

Inmunofenotipado multicolor con colorante de viabilidad fijable ViaKrome 405

Inmunofenotipado multicolor sin tinción de viabilidad

Comparación de los análisis de muestras con y sin exclusión de células muertas. Las CMSP descongeladas se estresaron por calor (55 °C durante 10 minutos) antes de la tinción de inmunotinción sin (A) o con (B) la adición de colorante de viabilidad fijable ViaKrome 405. A continuación, las células se procesaron con el kit de preparación de tinción celular PerFix-nc (número de pieza B10825) y se tiñeron con Granzima B-FITC, CD19-PE, CD14-ECD, CD79a-PC5.5, CD3-PC7 y CD45-Krome Orange. Los datos se adquirieron utilizando el citómetro de flujo CytoFLEX LX N-V-B-Y-R-I y analizaron con el software de análisis Kaluza.  Las estadísticas de selección muestran el porcentaje de la población principal y difieren en las dos condiciones que muestran el efecto de eliminar células muertas antes de la selección secuencial.

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