Descripción del aislamiento de ARN de células

  • Extracción y purificación de ARN total de alta calidad de células cultivadas en un formato de 96 pocillos
  • Eliminación eficiente de ADN genómico y otros contaminantes
  • No se requiere centrifugación ni filtración por vacío
  • Ideal para aplicaciones de expresión génica
  • Admite el procesamiento manual y métodos de automatización completa en las estaciones de trabajo de automatización de laboratorio Biomek NXP y FXP
  • Rendimiento: Dos placas de 96 pocillos en aproximadamente dos horas y 15 minutos en la Biomek FXP

Aplicación: Extracción de ARN de células cultivadas
Técnicas de aplicaciones posteriores: qRT-PCR, análisis de micromatrices

Descripción general del proceso

1. Comenzar con células cultivadas o células primarias 2. Lisar las células cultivadas con tampón de lisis y proteinasa K, transferir a la nueva placa 3. Unir el ARN total a las esferas paramagnéticas 4. Separar las esferas de los contaminantes, lavar con tampón de lavado y etanol 5. Añadir DNasa para digerir el ADN genómico 6. Reunir el ARN a las esferas con tampón de lavado y retirar los contaminantes 7. Lavar las esferas magnéticas con etanol al 70 % para eliminar los contaminantes residuales 8. Eluir el ADN de las partículas magnéticas.

Mayor recuperación de ácidos nucleicos

El método de extracción de Agencourt RNAdvance Cell v2 produjo de forma rutinaria una recuperación de ARN total superior en comparación con los métodos RNeasy* y MagneSil* de la competencia a partir del mismo número de células (Figura 1).

Figura 1. El ARN total de las 5 x 10 4 células HeLa se aisló utilizando el sistema Agencourt RNAdvance Cell v2, el kit RNeasy o el kit MagneSil. La cuantificación se realizó mediante el ensayo RiboGreen*. Agencourt RNAdvance Cell v2 produjo de forma consistente mayor rendimiento que los competidores RNeasy y MagneSil.

Purificación de ARN de calidad

El sistema Agencourt RNAdvance Cell v2 se comparó con los kits RNeasy y MagneSil con respecto a la calidad del ARN total. El análisis de las muestras utilizando el bioanalizador Agilent* 2100 mostró que el ARN aislado con Agencourt RNAdvance Cell v2 obtuvo puntuaciones de número de integridad de ARN (RIN) consistentemente superiores respecto a las tecnologías de la competencia (Figura 2). Para obtener más información sobre las puntuaciones RIN de calidad del ARN, consulte Genomics and Proteomics v.4; no 5, pp.14–21.

Figura 2.  Las muestras de ARN se aislaron utilizando el bioanalizador Agilent 2100 RNA NanoChip. El ARN total se extrajo de 5 x 10 4 células HeLa utilizando (A) Agencourt RNAdvance Cell v2, (B) RNeasy o (C) MagneSil (protocolos estándar). El número de integridad de ARN (RIN) promedio según lo determinado por el bioanalizador Agilent 2100 (cinco réplicas de extracción realizadas en 5 x 10 4 células HeLa para cada kit).

Resumen

Agencourt RNAdvance Cell v2 es un método sencillo y altamente eficiente de aislamiento y purificación de ARN total de células cultivadas. Su rendimiento superior ofrece ARN de alta calidad para su uso en aplicaciones de expresión génica de PCR en tiempo real o micromatriz. Con la flexibilidad que brindan los formatos de placa de 96 pocillos, desde manuales hasta totalmente automatizados, la tecnología basada en esferas paramagnéticas de SPRI Agencourt permite eliminar de manera eficiente los contaminantes sin necesidad de filtración ni centrifugación. Agencourt RNAdvance Cell v2 produce mayor recuperación, mejor calidad y resultados más consistentes en comparación con otras tecnologías de aislamiento y purificación de ARN disponibles con una solución de automatización poco laboriosa.